對(duì)于特定抗體，我應(yīng)該使用哪種抗原修復(fù)方法

一些公司測(cè)試其抗體的免疫組織化學(xué)應(yīng)用，并將在數(shù)據(jù)表中包含建議的 抗原修復(fù)方法（注意：一些建議的方法不是最佳的）。如果以上都沒有給您明確的答案，則需要進(jìn)行測(cè)試。

如何使用各種抗原修復(fù)方法對(duì)新抗體進(jìn)行測(cè)試

最初，您可能想要測(cè)試 HIER 中的兩種方法，例如 檸檬酸鹽緩沖液 (pH 6)和 Tris-EDTA (pH 9)，以及 PIER 中的一種或兩種方法，例如 蛋白酶 K和/或 胰蛋白酶。這應(yīng)該會(huì)給您一個(gè)很好的機(jī)會(huì)獲得特定抗體的最佳抗體。

我用各種抗原修復(fù)方法測(cè)試了我的抗體 ，但仍然沒有結(jié)果

該抗體可能不適合福爾馬林固定、石蠟包埋的組織（某些抗體僅適用于冰凍切片），或者該抗體有問題（過(guò)期或損壞），您可能需要改用其他抗體。

在熱誘導(dǎo)表位修復(fù) (HIER) 方法中，哪一種比較好

檸檬酸鹽緩沖液（pH 6）法是常用的方法之一。一些研究表明 Tris-EDTA (pH 9)或 Tris-HCl (pH 10) 更佳。測(cè)試可能是了解哪種抗體適合特定抗體的最佳方法。

使用HIER進(jìn)行預(yù)處理時(shí)需要考慮哪些關(guān)鍵因素

(1) 修復(fù)液溫度應(yīng)在95℃左右。

(2)孵育時(shí)間至少10分鐘，一般20分鐘左右。

(3) 修復(fù)液的pH值取決于您所使用的溶液。

在蛋白水解酶誘導(dǎo)表位修復(fù) (PIER) 方法中，哪一種比較好

蛋白酶 K似乎是常用的一種。濃度、孵育時(shí)間和溫度可能是需要考慮的更重要的因素。同樣，測(cè)試是了解哪種抗體適合特定抗體的最佳方法。

使用PIER進(jìn)行預(yù)處理時(shí)需要考慮哪些關(guān)鍵因素

(1) 酶的濃度通常為 0.05-0.1%，具體取決于組織和固定的類型。

(2)孵育時(shí)間可為5-30分鐘，常用10-15分鐘。

(3)孵化溫度通常為37 ℃。

冰凍切片是否需要進(jìn)行抗原修復(fù)：新鮮冰凍切片的免疫染色不需要進(jìn)行抗原修復(fù)。因?yàn)榭乖迯?fù)是破壞福爾馬林固定形成的交聯(lián)，將新鮮冰凍切片切片并用冰冷的丙酮固定5-10分鐘。