nvigen：MagVigen™ Easy DNA Select Kit

MagVigen™ DNA Select 納米顆粒是 DNA 純化的理想選擇。 MagVigen™ DNA Select 納米粒子能夠有效回收雙鏈和單鏈 DNA。經(jīng)過短暫孵育后，MagVigen™ DNA Select 納米粒子捕獲 DNA 產(chǎn)物。生成的納米顆粒-寡核苷酸復(fù)合物可以通過磁鐵與樣品的其余部分分離?？梢允褂孟疵摼彌_液從納米顆粒上洗脫保留的基因組材料。

MagVigen™ DNA Select 納米顆粒能夠從檢測樣品（例如細(xì)胞裂解液）中純化 DNA 產(chǎn)品，使其不含鹽和其他污染物。純化的 DNA 產(chǎn)物可通過凝膠電泳、PCR 定量和測序進(jìn)行進(jìn)一步分析。

DNA 選擇用于捕獲的納米顆粒。如果 DNA 數(shù)量或樣品體積增加，則相應(yīng)放大。

產(chǎn)品內(nèi)容：

• MagVigen DNA 尺寸選擇納米粒子

• 洗脫液：Tris (PH 8)

所需材料（不含）

• 75%乙醇

• 磁力架，目錄號 A20006

所有材料均應(yīng)儲存在 4°C 下。保質(zhì)期：6個月

DNA捕獲

1. 從儲存中取出 MagVigen™ DNA Select 納米顆粒溶液，并將其恢復(fù)至室溫。




2. 使用前渦旋 MagVigen™ DNA 選擇納米顆粒 10 秒。




3. 對于每20μl 含有不超過 1,000ng DNA 的 DNA 樣品，添加40~9 μl 體積的 Easy DNA Select 珠子。

注： MagVigen 納米粒子的體積比為 (A)2.0:1 至 (B)0.7:1：DNA 樣品可用于分離 ≥ (A)100bp 至 (B)400 bp 的 DNA，可以測試不同的比例以達(dá)到所需的 DNA 大小選擇。

4. 渦旋或移液器吸取反應(yīng)溶液以充分混合

注意： 捕獲反應(yīng)期間最好不要引入氣泡。

5. 將 MagVigen™ DNA Select 納米顆粒-DNA 反應(yīng)在室溫下孵育5~15 分鐘。




6. 孵育后，使用磁鐵將 DNA 捕獲的納米顆粒從溶液中分離出來。




7. 用移液器小心地除去上清液，注意不要擾動捕獲 DNA 的納米顆粒沉淀。




8. 將磁鐵保持在適當(dāng)?shù)奈恢?，通過添加 100μl 新鮮制備的 75% 乙醇來清洗 DNA 捕獲的納米顆粒沉淀。靜置 3 分鐘。

注意： 根據(jù)需要調(diào)整乙醇的體積，以充分覆蓋 DNA 捕獲的納米顆粒顆粒。

9. 取出并丟棄乙醇溶液。




10. 重復(fù)步驟8~9，總共進(jìn)行兩次洗滌。




11. 將珠子風(fēng)干 2~10 分鐘。




12. 添加 20μl 洗脫緩沖液，從納米顆粒中洗脫捕獲的 DNA。

注： 洗脫緩沖液的體積可根據(jù)需要調(diào)整。

13. 輕輕吹打混勻，室溫孵育 5 分鐘。

注意：洗脫反應(yīng)過程中最好不要引入氣泡。

14. 用磁鐵將納米顆粒與洗脫的 DNA 分離。




15. 將含有 DNA 產(chǎn)物的上清液轉(zhuǎn)移至干凈的管中。純化的 DNA 可用于下游應(yīng)用。

    DNA 大小切割	100bp	200bp	300bp	400bp	500bp
    比率	>1.8~2.2	1.0~1.6	0.8~0.9	0.7	0.6或<0.6

    表 1. MagVigen™ 溶液與 DNA 樣品溶液的比例的一般指導(dǎo)，以實現(xiàn)所需的 DNA 大小截斷（100 bp~500 bp）。人們可以滴定不同的比例來確定最佳條件。

    

圖 1顯示了通過調(diào)整珠子體積與 DNA 樣品體積的比率得到的大小結(jié)果。使用 Themo Scientific GeneRuler 100 bp DNAladder 和 2% 瓊脂糖凝膠。

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