本產品是使用 SYBR Green I 嵌合熒光法進行 qPCR 的專用試劑。 核心組分 Perfect Start DNA Polymerase 是基于化學法修飾的熱啟動 DNA聚合酶，配合針對 qPCR 優(yōu)化的***適 Buffer,可以有效抑制非特異擴增，從而顯著提高擴增效率，適用千進行高靈敏度的 qPCR 反應。本產品是一種含有 qPCR 反應錄適濃度 SYBR Green I 的 2x 預混試劑，可以在寬廣的定量區(qū)域內得到良好的標準曲線，對靶基因進行準確定量、檢測，重復性好，可信度高。 本產品中含有特殊的ROX Passive Reference Dye,適應千所有 qPCR 儀器，無需在不同儀器上調整 ROX 的濃度，只需在配制反應體系時加入引物和模板即可進行擴增。

適用機型Bio-Rad CFX96™， CFX384™ ， iCycler iQ™ ， iQ™5， MyiQ™ ，MiniOpticon™ ， Opticon® ， Opticon 2 ， Chromo4™ ； CepheidSmartCycle®；Eppendorf Mastercycle® ep realplex，realplex 2 s；llluminaEco qPCR ； Qiagen/Corbett Rotar-Gene®Q ， Rotor-Gene® 3000 ，Rotor-Gene® 6000；Roche Applied Science LightCycler™ 480; ThermoScientific PikoReal Cycler；Applied Biosystems 5700，7000，7300，7700，7900，7900HT, 7900HT Fast；StepOne™，StepOnePlus™；AppliedBiosystems7500 ， 7500 Fast ， ViiA™7 ； Stratagene MX4000™ ，MX3005P™，MX3000P™。注意：本產品使用特殊的 ROX Passive Reference Dye, 適用于所有qPCR 儀器（無 ROX 校正儀器，低濃度 ROX 校正儀器，高濃度 ROX校正儀器），無需在不同儀器上調整 ROX 的濃度。注意事項1. 使用前請上下顛倒輕輕混勻，盡量避免起泡，并經短暫離心后使用。2. 本產品中含有 SYBR Green I 熒光染料和 ROX 染料，保存本產品或配制 PCR 反應液時應避免強光照射。3. 如需頻繁使用，可存放于 2-8℃，盡量避免反復凍融，反復凍融可能使產品性能下降。

使用方法1. 在 qPCR 管中配制如下混合液(以 20ul 反應體系為例)。

試劑                                                                       20ul 體系 

PerfectQ Universal Green qPCR Premix              10 ul 

Forward Primer，                                                 10uM 0.4ul 

Reverse Primer，                                                 10uM 0.4ul 

Template DNA /cDNA XulRnase-free Water      up to 20ul

注意：反應體系中各組分的量可根據以下原則自行調整：a. 一般來說，反應體系中引物終濃度為 0.2uM 即可得到較好的擴增效果。當反應性能比較差時，可以在終濃度 0.1-1.0uM 范圍內調整引物濃度。b. qPCR 靈敏度*高，建立反應體系時加入模板量的準確程度對最終定量結果會有很大的影響。推薦將模板稀釋后加入反應體系中，這樣可以有效提高實驗的重復性。c. 如模板類型為未稀釋 cDNA 原液，使用體積不應超過 qPCR 反應總體積的 1/10。2. 按下列條件進行 qPCR 反應

注意：a. Perfect Start DNA Polymerase 需要熱激活處理以恢復酶活，請至少設置 PCR 反應預變性條件為 95°C 5min。如果模板的 GC 含量較高，可將預變性時間延長至 10min。。b. 延伸時間請根據使用的 Real-time PCR 儀所需要的數據采集最短時間限制自行調整使用 ABI 7700 和 7900HT 時至少 30s; 使用 ABI 7000和7300時至少31s; 使用ABI 7500時至少34s; 使用ABI StepOnePlus™時至少 10s。c. 儀器類型不同，融解曲線采集程序不盡相同，使用儀器默認融解曲線采集程序即可。